Пцр на микобактерии туберкулеза

Описание

Микобактерии туберкулёза, ДНК M. tuberculosis, bovis complex, качественный — определение ДНК M. tuberculosis в крови, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Метод ПЦР позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы ДНК микроорганизма, не выявляемые другими методами. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий, специфичных для данного возбудителя участка ДНК.

С помощью ПЦР-анализа можно диагностировать инфекцию в остром периоде и выявлять случаи носительства.

ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей, даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

Туберкулёз — инфекционное заболевание. Он вызывается человеческим (M. tuberculosis) и бычьим (M. bovis) типом микобактерий.

Заражение Mycobacterium tuberculosis происходит воздушно-капельным путём, а Mycobacterium bovis — алиментарным (через пищевые продукты, в том числе и молоко), возможно заражение контактным путём (через раневую поверхность) и внутриутробно (от больной туберкулёзом матери к плоду).

Клинические проявления туберкулёза
Клинические проявления туберкулёза: кашель с выделением мокроты более 3-х недель, боль в грудной клетке, кровохарканье, длительное повышение температуры, потеря веса, снижение аппетита, повышенная утомляемость. Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно.

Показания:

  • воспаление эндометрия;
  • наличие перенесённого туберкулёза в анамнезе;
  • бесплодие при исключении гинекологической патологии у женщин;
  • ненормальная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания.

Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приёма пищи.

Накануне сдачи исследования нужно исключить физические и психоэмоциональные нагрузки.

Забор крови производится в соответствующую пробирку строго до метки.

Интерпретация результатов
Тест качественный. Результат выдаётся в терминах «обнаружено» или «не обнаружено».

«Обнаружено»:

  • в анализируемом образце обнаружены специфические для микобактерии фрагменты ДНК, инфицирование микобактериями.

«Не обнаружено»:

  • в анализируемом образце не обнаружены специфические для микобактерии фрагменты ДНК или концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности теста.

28.03.16 09:56

С помощью ПЦР-диагностики можно своевременно не только обнаружить инфекцию, но и изолировать человека, назначив ему соответствующее лечение. Кроме того, данный анализ способен исследовать устойчивость микобактерий к известным во фтизиатрии медицинским препаратам, тем самым, позволяя подобрать правильную схему лечения, исключив из неё те лекарства, к которым есть устойчивость возбудителя.

Cправочно:

Полимера́зная цепна́я реа́кция (ПЦР) — метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных). Метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка нуклеиновой кислоты ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro).

Метод ПЦР имеет очень высокую информативность и позволяет легко и эффективно определять наличие микобактерии в организме, но, только если проводить анализ мокроты (если это туберкулез органов дыхания) или мочи (при туберкулезе орагнов мочевыделительной системы), а не крови. ПЦР анализ крови на туберкулез нельзя считать информативным, так как ДНК микобактерии туберкулеза в крови бывает только у больных туберкулезным сепсисом, что на практике встречается весьма редко.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет всего в течение нескольких часов обнаружить возбудителя инфекции, причем выявить можно даже 1-2 молекулы среди огромного количества.

Данный тест имеет массу достоинств, которые проявляются в следующем:
• 100%-ное выявление, так как в биологической пробе определяется от 10 до 100 клеток;
• специфичность теста очень высока: выявляется особенный фрагмент, который имеется только в конкретном возбудителе;
• скорость получения результата анализа – от 4 до 4,5 часа.

С помощью этой диагностики можно своевременно не только обнаружить инфекцию, но и изолировать человека, назначив ему соответствующее лечение. Кроме того, данный анализ способен исследовать устойчивость микобактерий к известным во фтизиатрии медицинским препаратам, тем самым, позволяя подобрать правильную схему лечения, исключив из неё те лекарства, к которым есть устойчивость возбудителя. Чтобы провести полимеразную цепную реакцию на устойчивость, используют гены, запоминающие невосприимчивость к некоторым лекарствам, после чего через двое суток можно получить результат.

Андрей Чередниченко, заведующий ПЦР-лабораторией: «На сегодняшний день во фтизиатрической службе СФО работают пять ПЦР-лабораторий. Лаборатория ННИИТ является одной из самых современных, здесь используется формат Real-Time ПЦР (или ПЦР в реальном времени). Эта методика позволяет не только выявить ДНК возбудителя туберкулеза, но и те его мутации, которые указывают на устойчивость к препаратам противотуберкулезного ряда. Одним из передовых методов ПЦР является метод гибридизации на стрипах, который позволяет провести определение микобактерий и их устойчивость к противотуберкулезным препаратам».

Актуальность проведения ПЦР-исследования на туберкулез прежде всего в том, что данная методика позволяет выявлять микобактерии у пациентов без бактериовыделения. Благодаря данной методике диагностировать туберкулез и назначать правильные схемы лечения (учитывая устойчивость к определенным препаратам) стало значительно легче.

К прямым методам обнаружения микобактерий туберкулеза можно отнести и бурно развивающиеся в последние годы подходы, сущность которых состоит в выявлении в исследуемых образцах диагностического материала специфических фрагментов цепи ДНК возбудителя. Среди применяемых для этого молекулярно-биологических методик наиболее широкое распространение получил метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), в основе которого лежит многократное увеличение числа копий специфического участка ДНК (так называемая направленная амплификация ДНК): 20 циклов ПЦР приводят к увеличению исходной ДНК в 1 миллион раз, что позволяет визуализировать результаты методом электрофореза в агарозном геле. Очень высокий уровень чувствительности (95 % и более), являющийся главным достоинством метода, достигается за счет того, что в результате многократного копирования уровень специфической олигонуклеотидной последовательности в редакционной пробе возрастает в 106 раз. По своей чувствительности метод ПЦР при туберкулезе органов дыхания в два раза превосходит эффективность культуральной диагностики.

Метод особенно актуален для туберкулеза, поскольку эффективен в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью, определение которых требует длительного культивирования или сложных питательных сред.

ПЦР-диагностика туберкулеза, как правило, строится на использовании последовательностей ДНК специфичных для всех 4 видов группы туберкулеза. Часто для этих целей используют праймеры для выявления последовательностей IS-элементов, например, IS-986 или IS-6110, поскольку данные мигрирующие элементы характерны только для видов микобактерий группы туберкулеза и присутствуют в геноме микобактерий в числе нескольких копий. Выделение ДНК из чистых культур и клинических образцов (мокроты больных) возможно осуществлять любым приемлемым методом, например, методом Boom с использованием лизирующего буфера на основе гуанидина, тиоционата и двуокиси кремния в качестве носителя ДНК.

Проведение ПЦР-диагностики туберкулеза

В качестве примера праймеров [49] для идентификации микобактерий группы туберкулеза можно привести праймеры, фланкирующие фрагмент размером 245 пар нуклеотидов мигрирующего элемента IS-986, содержащегося в геноме M.tuberculosis в числе 2-8 копий.

Амплифицированный фрагмент выявляют электрофорезом в 1,6 % агарозном геле.

Данная пара праймеров была проверена на специфичность с использованием в качестве контроля 100 нг/проба ДНК близкородственных микроорганизмов; ДНК возбудителей легочных заболеваний; ДНК микроорганизмов, входящих в микрофлору человека (например, E.coli, S. aureus и др.); образцов ДНК человека.

Испытания данной пары праймеров с параллельным бактериоскопическим и культуральным обследоваванием были проведены на клинических образцах мокроты, полученных от больных с различными клиническими формами туберкулеза. Методом ПЦР возбудитель был выявлен у 90,6% больных туберкулезом, в то время как значительно более длительными по времени микробиологическими методами микобактерии были выявлены только у 39,6% больного.

Роль молекулярной диагностики в клинической практике повышается, поскольку увеличивается число больных со скудным бактериовыделением.

Однако применение метода ПЦР чревато получением большого количества ложноположительных результатов, обусловленных как техническими погрешностями, так и особенностями самого метода. Кроме того, метод не позволяет определять степень жизнеспособности выявляемых микобактерий.

Основным недостатком ПЦР является опасность лабораторной контаминации микобактериальной ДНК. Поэтому в настоящее время разработаны достаточно жесткие сертификационные требования для ПЦР-лабораторий, предусматриваюшие наличие трех изолированных помещений. ПЦР — это сложная современная технология, использование которой требует помимо соответствующей аппаратуры наличия высококвалифицированного персонала.

Таким образом, при постановке диагноза результаты ПЦР являются дополнительными и должны сопоставляться с данными клинического обследования, рентгенографии, микроскопии мазка, посева и даже ответа на специфическое лечение.

Наименование Микобактерии туберкулёза/бовис, M. tuberculosis/bovis (кач.)
Биоматериал
Наименование на латинском языке
Наименование на английском языке
Срок 2 р.д.
Сроч.*
Тип кач.

Цена указана без взятия биоматериала

* Услуга доступна в Москве и Московской области, уточняйте стоимость срочного исполнения в лаборатории.

Стоимость забора биоматериала

Настоящим уведомляем Вас о том, что с 01 марта 2016 года Лаборатория «Литех» изменяет порядок и стоимость забора биоматериала.

Наименование услуги Стоимость в рублях*
1 Забор крови из вены, вне зависимости от количества пробирок 170
2 Взятие мазков, вне зависимости от количества стёкол 300

*Цены у Партнеров могут отличаться.

Анализ мочи и кала принимается в специальных контейнерах, бесплатно получить которые можно в медицинских офисах «Литех» или приобрести в аптеке.

Внимание! Скидки и специальные предложения не распространяются на забор биологического материала и генетические исследования

Лабораторная диагностика туберкулеза нужна для обнаружения патогенных бактерий M. Tuberculosis. Анализыпоказаны также для контроля терапии.

Микобактерии обычно поражают легкие. Необходимость лабораторной диагностики туберкулеза обусловлена тем, что заболевание часто протекает в скрытой форме, то есть без внешних симптомов.

Выделяют две формы заболевания: открытую и закрытую. Для первой характерно обнаружение возбудителей в мокроте. Лабораторная диагностика отделяемого при закрытой форме не показывает микроорганизмы.

Для определения заболевания необходимо проходить комплексное обследование, включающее рентген легких, микробиологические тесты, реакцию Манту, ПЦР для выделения ДНК бактерий.

Если лабораторные анализы и прочие методы диагностики подтверждают туберкулез, необходимо лечение специальными препаратами. Терапия продолжительная — длится не менее полугода. Людям, общавшимся с больным, необходимо также пройти обследование. Специалист назначит профилактические меры. Для защиты детей показана вакцинация.

Лабораторная диагностика туберкулеза в Литех

Точность применяемых лабораторных методов, а также скорость обращения пациента снижают риск развития тяжелых форм, инфицирования других людей. Наша лаборатория применяет современные технологии для обнаружения M. Tuberculosis: ПЦР, выделение антител и т.д. У нас можно сдать общий анализ крови. За справками обращайтесь к специалистам.

К типичным признакам болезни легких относят:

  • длительный влажный кашель,
  • дыхательную недостаточность,
  • слабость,
  • ночную потливость,
  • снижение веса.

Где проводится: Тонус

Срок выполнения: 2 рабочих дня

+ Забор материала 200 руб.

+ Забор анализа на дому у взрослого (только Нижний Новгород) 200 руб.

  • Описание
  • Подготовка
  • Показания
  • Интерпретация результатов

Туберкулез – это распространенное социально значимое заболевание, характеризующееся поражением лёгких (чаще) и других органов. Возбудителями туберкулеза являются кислотоустойчивые бактерии рода Mycobacterium: Mycobacterium tuberculosis (занимает первое место по частоте заболеваний), Mycobacterium bovis (второе место), реже другие представители: M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum. Основной путь заражения туберкулезом – воздушно-капельный. Риск заразиться зависит от состояния иммунитета, частоты контакта с больным, бытовых и социальных условий.

Туберкулез в течение длительного времени может протекать скрыто, без каких – либо симптомов, его обнаружение в этом случае является случайной находкой при проведении флюорографии или рентгенографии грудной клетки. При развитии симптоматики больного беспокоит слабость, субфебрильная температура, потливость (особенно в ночное время), далее – постоянный кашель с отхождением мокроты или кровохарканьем, насморк, затруднение дыхания.

Диагностика туберкулеза складывается из обследования лёгких (рентгенография, флюорграфия, если речь идет о легочной форме заболевания) и лабораторных методов (анализ на микобактерию туберкулеза). Лабораторная диагностика туберкулеза включает в себя несколько методов: микроскопия мазка (чаще всего исследуют мокроту), классический культуральный метод, ИФА, ПЦР исследование. Специфичность ПЦР анализа на микобактерии туберкулеза составляет 100%.

Материалом для исследования является: мокрота, смывы с бронхов, плевральная жидкость, моча, эякулят, секрет простаты. Анализ на микобактерии туберкулеза ПЦР – методом представляет собой качественный тест. Это значит, что результата выдается в категориях «обнаружено»/ «не обнаружено».

Чтобы сдать анализ на микобактерии туберкулеза, от пациента не требуется специальной подготовки.

Сдать анализ на микобактерии туберкулеза необходимо в следующих случаях:

  • Лихорадка, характеризующаяся ежедневным двойным повышением и понижением температуры тела. На фоне туберкулиновой гиперчувствительности или туберкулиновой анергии.
  • Острые воспалительные заболевания верхних и нижних дыхательных путей с длительным контактом с туберкулёзным больным в анамнезе.
  • Ненормальная реакция на туберкулиновую пробу (гиперчувствительность или анергия) на фоне обострения какого-либо системного заболевания.
  • Подозрение на системную волчанку.

Антитела к возбудителю туберкулеза (M. tuberculosis) – это специфические иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование возбудителем туберкулеза.Туберкулез – это инфекционное заболевание, возбудителями которого являются аэробные микобактерии (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanus, M. microti), распространенные в почве, воде и у животных. Mycobacterium tuberculosis – это вид микобактерий, который вызывает туберкулез у человека в 92 % случаев.

M. tuberculosis передается воздушно-капельным путем от больных туберкулезом в активной форме. У 90 % людей после первичного инфицирования микобактерии оседают в нижних отделах легких и не приводят к развитию заболевания, так как вырабатывается иммунный ответ, не допускающий увеличения количества бактерий. Однако в случае сильного ослабления иммунной системы туберкулезные палочки начинают активно размножаться и туберкулез переходит из латентной формы в активную. Возможно поражение легких, костей, суставов, мочеполовых органов, лимфатической системы, кожи, глаз и нервной системы.

Микроскопическое исследование возбудителя в посеве мокроты по-прежнему считается «золотым стандартом» в диагностике туберкулеза. Однако данный метод имеет как свои достоинства (высокая специфичность), так и недостатки (низкая чувствительность, т. к. необходима определенная концентрация бактерий в образце). Эффективность метода ниже в отношении специфических категорий лиц (ВИЧ-инфицированных, людей старше 60 лет и детей, у которых к тому же существуют сложности со сбором мокроты). Кроме того, данное исследование занимает продолжительное время, т. к. для роста бактерий требуется 6-8 недель. Наряду с бактериологическим методом широко распространено рентгенологическое исследование. Оба метода применимы только к легочным формам туберкулеза. С другой стороны, при помощи метода туберкулиновой пробы практически невозможно дифференцировать латентную и активную формы туберкулеза.

Дифференциальная скрининговая диагностика активного туберкулеза возможна при помощи определения специфических антител к М. tuberculosis методом иммуноферментного анализа.

На активной стадии туберкулеза начинается интенсивная выработка IgG и IgM антител к специфическим антигенам, которые могут быть выявлены в сыворотке крови уже через месяц с начала активизации микобактерий. Высокая специфичность теста достигается использованием специфических для M. tuberculosis антигенов, что исключает ложноположительные результаты у вакцинированных и инфицированных другими микобактериями лиц. Чувствительность данной тест-системы составляет от 61 % (туберкулез лимфатических узлов) до 100 % (туберкулезный экссудативный плеврит) в зависимости от локализации инфекции; специфичность – 95 %.

Используется анализ:

  • Для выявления активного туберкулеза, в особенности внелегочных форм.
  • Для мониторинга эффективности лечения туберкулеза.
  • Для выявления инфицированных лиц.
  • Для подтверждения диагноза (наряду с использованием дополнительных диагностических исследований).

Назначается анализ:

  • Когда известно, что пациент имел длительный контакт с больными туберкулезом или что его работа связана с постоянным контактом с людьми из групп риска (бездомными, инъекционными наркопотребителями, лицами, находившимися в местах лишения свободы).
  • При соответствующих симптомах: слабости, быстрой утомляемости, субфебрильной температуре тела, ночной потливости, персистирующем кашле в течение 2-3 недель, боли в грудной клетке (легочном туберкулезе), хронических болях в спине, суставах, брюшной области с невыясненной этиологией.
  • При длительном безрезультатном лечении хронического простатита, цистита, пиелонефритов и при воспалении эндометрия (туберкулезе мочеполовых органов).
  • При анемии, лейкоцитозе.

Этот тест особенно важен, когда при отрицательном результате рентгенологического исследования, микроскопии и методе ПЦР есть симптомы неясного происхождения, схожие с проявлениями туберкулеза внелегочных форм.
Положительный результат – недостаточное основание для постановки диагноза «активный туберкулез», так как данный анализ должен сопровождаться другими диагностическими тестами (микроскопией бактериальных культур, ПЦР) в соответствии с клинической картиной и предполагаемыми очагами локализации инфекции для более углубленного обследования.
На ранней стадии инфекции тест может дать отрицательный результат из-за того, что еще не выработалось достаточное количество антител. В таких случаях при симптомах инфекции рекомендуется повторить исследование через 2-7 недель или провести другие виды тестирования.
Тест нечувствителен к БЦЖ-вакцинации, так какв нем задействованы антигены, специфичные для M. Tuberculosis и нехарактерные для M. Bovis.
Возможность ложноположительных результатов данного анализа исключена в связи с отсутствием взаимовлияния с другими видами микобактерий.
Тест рассчитан на выявление только активной формы туберкулеза вне зависимости от его локализации.
Данное исследование подходит для пациентов с иммунодефицитами различного происхождения (ВИЧ, онкологией), так как тест-система позволяет обнаружить иммуноглобулины всех трех классов (G, M, A).

В распознавании и дифференциальной диагностике туберкулеза, а также в определении эффективности проводимого лечения важную роль играют лабораторные методы исследования. Среди них большое значение имеют прежде всего способы обнаружения микобактерии туберкулеза в различных выделениях, воспалительных экссудатах, жидкостях и тканях организма больного.

При туберкулезе легких микобактерии находят прежде всего в мокроте. Частота, массивность и постоянство бацилловыделения зависят от формы процесса. Оно часто имеет место при инфильтративном и особенно деструктивном туберкулезе легких. Реже или периодически выделяют микобактерии больные очаговыми, диссеминированными и цирротическими формами туберкулеза без явного распада легочной ткани. Существенное значение имеет при этом состояние бронхов. При их специфическом поражении, но сохраненной дренажной функции микобактерии выявляются с мокротой сравнительно чаще и с большим постоянством, чем при нормальном состоянии бронхов или при их стенозе, вызывающем блокаду каверны.

Микобактерии туберкулеза находят в большом количестве в обильно выделяющейся мокроте, а в скудном отделяемом, наоборот, они встречаются реже и в виде единичных экземпляров. У больных, не выделяющих мокроту, лучшие результаты дает применение раздражающих аэрозольных ингаля пий 10—15% раствора поваренной соли в 1% растворе питьевой соды Н. М. Рудой и соавт. (1971) применяют с этой целью смесь, состоящую из 5 мл 10% раствора хлорида натрия, 1 мл химопсина, растворенного в физиологическом растворе, и 20 капель солутана.

Второе место по эффективности выявления бацилловыделения у больных, не выделяющих мокроту, занимает исследование промывных вод трахеи и бронхов, которое предложил Я. С. Зобин (1939). В настоящее время для анестезии гортани у взрослых применяют 0,25% раствор дикаина, разведенный в 10% растворе новокаина. Этот раствор наливают во время фонации на голосовые связки в количестве 0,5—1 мл. У больных с повышенным глоточным рефлексом этим раствором смазывают заднюю стенку глотки. Затем в трахею шприцем с напаянной канюлей вводят 10—20 мл физиологического раствора комнатной температуры.

При этом в результате раздражения слизистой оболочки бронхов возникает кашель, при котором из глубоких дыхательных путей вместе с введенной жидкостью выделяются слизь и мокрота. Это отделяемое исследуют на присутствие микобактерии туберкулеза или другой микробной флоры.

Пцр на микобактерии туберкулеза

Исследование промывных вод бронхов редко сопровождается серьезными осложнениями. Только при сильном, длительном и приступообразном кашле иногда появляется кровохарканье, может аспирироваться инфекционный материал в здоровые участки легочной ткани, нарастает сердечная недостаточность. Такие явления отмечаются главным образом у больных с сопутствующей бронхиальной астмой, пороком сердца, гипертонией. В подобных случаях, очевидно, не следует прибегать к данному методу исследования. При отсутствии таких противопоказаний, особенно у больных с ограниченными формами процесса, у которых чаще всего и возникает необходимость в исследовании промывных вод бронхов, обычно не наблюдается каких-либо осложнений, и поэтому его можно производить не только в клинических, но и в амбулаторных условиях.

Менее эффективно производимое натощак исследование промывных вод желудка, в которых может содержаться бациллярная мокрота или бронхиальная слизь, чаще заглатываемая детьми, а иногда и взрослыми (Аrmand-Dellille, 1927). Кроме того, микобактерии могут проникать в желудок через его слизистую оболочку при гематогенном распространении инфекции в организме, а также при забрасывании бациоллосодержащей желчи (М. Д. Розанова, 1950). Пользоваться этим методом рекомендуется в тех случаях, когда не удается получить мокроту при раздражающих ингаляциях, при противопоказаниях к применению промывания бронхов или при невозможности их проведения по другим причинам.

Наблюдения показывают, что в промывных водах трахеи и бронхов микобактерии туберкулеза обнаруживают значительно чаще, чем в желудочном содержимом. При первом способе исследования больных туберкулезом легких, которые не выделяли мокроты, Suzuki (1951) получил положительные результаты у 31 % исследуемых, между тем как в промывных водах желудка — только у 4,7%. Castillo (1949), исследовавший промывные воды бронхов 2414 абациллярных больных, выявил микобактерии у 45,4% при ограниченных формах туберкулеза легких, у 17% — при отсутствии рентгенологических изменений в них и у 10% — субъективно здоровых «контактов».

Наименее информативно определение бацилловыделения с помощью исследований мазков слизи из гортани, а также промывания только верхних отделов дыхательных путей.

У части больных можно выделить микобактерии из крови. По наблюдениям 49 авторов, обобщенным в 1954 г. Dalencour, бациллемия отмечалась в среднем у 5,3% больных различными формами туберкулеза. П. И. Беневоленский (1945) установил ее у 3,7% больных туберкулезом легких (исключая страдающих гематогенным процессом). Чаще обнаруживают микобактерии в крови при туберкулезе кожи, обширных гематогенных диссеминациях в легких, при менингите. Однако, по сводным данным Kallos (1937). основанным на изучении гемокультур, выделенных от 14 502 больных, туберкулезная бациллемия имела место всего лишь у 1,13% из них.

Частота выявления микобактерии зависит не только от формы заболевания, метода получения материала, но и от способа его исследования (бактериоскопия, посев, заражение животных). Микобактерии туберкулеза обнаруживают при прямой бактериоскопии мазков мокроты, окрашенных по Цилю—Нельсену, при микроскопии с использованием метода обогащения — флотации и люминесцентного способа исследования. Методы обогащения повышают частоту обнаружения микобактерии туберкулеза в мокроте, промывных водах желудка и бронхов, в экссудате, спинномозговой жидкости, в каловых массах на 10—20% по сравнению с результатами прямой бактериоскопии.

Среди бактериоскопических методов выявления бацилловыделения наиболее чувствительным является люминесцентная микроскопия, повышающая возможность обнаружения в мокроте микобактерии на 15—20% по сравнению с обычной бактериоскопией, а при исследовании мазков из флотационных колец — на 8—10%. При этом облегчается изучение некоторых биологических свойств возбудителя — старения культур, аутолиза клеток и др.

Некоторые авторы утверждают, что при флюоресцентной (люминесцентной) микроскопии микобактерии туберкулеза можно выявить даже чаще, чем при посевах мокроты и других материалов на различные питательные среды. Kolbel (1955) обнаружил их при простой бактериоскопии у 39,7% больных, при бактериологическом методе — у 52,1%, а при люминесцентной микроскопии — у 73,6%. На преимущество последнего метода указывают Т. Н. Ященко и И. С. Мечева (1973), Н. С. Страхов и соавт. (1973).

Для суждения об эффективности проводимой антибактериальной терапии придают прогностическое значение уменьшению (или сохранению) в динамике массивности бацилловыделения. Поэтому целесообразно не только констатировать бацилловыделение, но и оценивать его количественный показатель. При этом при бактериоскопии бацилловыделение оценивается как обильное, если находят микобактерии в каждом поле зрения, умеренное — при наличии «единичных микробов в 40—50 полях зрения и скудное — при нахождении их единичных экземпляров в препарате.

Mycobacterium tuberculosis complex (комплекс микобактерий туберкулеза).

К нему относятся:

1. Человеческий тип (Mycobacterium tuberculosis или Typus humanus) – высокопатогенен для человека, основной возбудитель туберкулеза у человека. К человеческому виду МТБ восприимчивы, кроме самого человека, свиньи, кошки, собаки, крупный и мелкий рогатый скот. Следовательно, эти животные могут быть резервуаром микобактерий МБТ и представлять угрозу для человека.

2. Бычий тип (Mycobacterium bovis или Typus bovinus) – наиболее патогенен для крупного рогатого скота, хотя к нему восприимчивы все млекопитающие животные и человек. Для этого вида характерен алиментарный (через зараженное молоко и мясо от больных коров) и контактный (у работников животноводства – у доярок, лиц работающих на скотобойне) пути передачи. Особенностью заболевания туберкулезом, вызванном бычьим видом микобактерий, является частое поражение кишечника, мочеполовых органов и периферических лимфатических узлов, лекарственная резистентность к изониазиду и пиразинамиду, что затрудняет химиотерапию. Легочный туберкулез, вызванный данным типом микобактерий, иногда приобретает прогрессирующее течение, особенно в усло-виях позднего выявления заболевания (M. bovis одно время являлся частой при-чиной заражения скота в Европе, том числе в России, и на Американском континенте). Путем ликвидации инфицированных животных и пастеризации молока эти страны, в значительной степени, уменьшили распространенность туберкулеза человека, вызываемого M. bovis.

3. Mycobacterium bovis BCG – искусственно созданный штамм микобактерий бычьего типа заразный для человека.

4. Промежуточный тип (Mycobacterium africanum)- сходен по характерис-тикам с M. tuberculosis. Единственным важным отличием M. africanum является его резистентность к противотуберкулезному препарату тиоацетозону. Промежуточный тип микобактерий широко распространен в странах Африки, откуда и получил свое название.

5. Мышиный тип (Mycobacterium microti) — возбудитель туберкулеза у поле-вых мышей, но в редких случаях может вызывать заболевание у человека.

Методы исследования: полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (ПЦР Real-time)

Единицы измерения в ЦЛТ АБВ:(качественный анализ)

Пцр на микобактерии туберкулеза

Симптомы

  • Потливость появляется в случае выраженных изменений в пораженном органе.
  • Температура тела может быть нормальной, субфебрильной (чуть выше 37 ° C) или высокой — от 38 ° C. Часто меняется у больного в течение суток. К субфебрильной температуре больные быстро привыкают и перестают ее замечать.
  • Для поражений органов дыхательной системы характерны кашель, выделение мокроты (иногда с кровью), боль в груди, отдышка.
  • Кашель является одним из основных симптомов туберкулеза легких. Сначала появляется легкое покашливание, которое часто связывают с курением, остатками простудных процессов, бронхитом или трахеитом. Внимание: если кашель не проходит в течение 4 недель, это веское основание для проведения дополнительных исследований, чтобы установить его причину.
  • Выделение мокроты с кашлем. В начале она может не выделяться или быть в незначительном количестве. Позже, з развитием заболевания, пациент может выделять до 200 мл и больше мокроты в сутки с прожилками крови или без.

Диагностика

  • наличие или отсутствие заболевания;
  • локализацию процесса (где есть очаги инфекции)
  • активность, факт деструкции (инфильтрации, распада, обсеменения) тканей или ее отсутствие. Выделяют следующие фазы:
  • С выделением микобактерий туберкулеза (+)
  • Без выделения (-)
  • Пцр на микобактерии туберкулезаПрямая бактериоскопия. Была одним из первых лабораторных методов, но до сих пор используется некоторыми лабораториями. В мазке материала пациента после специальной окраски стараются увидеть и идентифицировать под микроскопом микобактерии туберкулеза (они имеют вид палочек красного цвета на общем синем фоне). Но потому, что микобактерии можно заметить, только когда их очень много (50 000-100 000 в 1 мл. материала), этот метод считается сегодня устаревшим и недостоверным так же, как и люминесцентный (когда микобактерии туберкулеза светятся после впитывания люминесцентных красок под микроскопом).
  • Пцр на микобактерии туберкулезаБактериологический метод является более надежным по сравнению с прямой бактериоскопией. Он позволяет подтвердить наличие возбудителя, если в 1 мл материала содержится 20-100 микробных тел. Их сеют (помещают) на специальные питательные среды, содержащие набор необходимых элементов на которых микобактерии питаются, растут, размножаются и образуют колонии, которые можно легко увидеть. Недостатком метода является длительность процесса. Первые колонии видны только на 18-30-й день культивации, и поэтому материалы держат до 3 месяцев в термостате при температуре 37 ° C, чтобы дать им достаточно времени для роста. Качество питательных сред является одним из важнейших факторов, влияющих на достоверность результата анализа. В случае несоблюдение условий их правильного хранения, приготовления и посева на них результаты искажаются.
  • Пцр на микобактерии туберкулезаМЛ ДIЛА использует только современный молекулярно-генетический методПЦР (полимеразной цепной реакции). С его помощью можно подтвердить наличие микобактерий туберкулеза при их минимальном количестве в материале (всего 5-10), и результат может быть готов уже через 3-4 часа после начала исследования. Используя ПЦР, выделяют и делают много копий (миллионов или миллиардов) определенного звена ДНК микобактерии туберкулеза. Участок ДНК микобактерий используется как генетический материал для точного подтверждения диагноза.
Метод Необходимое к-во бактерий в мазке для достоверности результата Ожидание результата
Прямая бактериоскопия 50 000-100 000 в 1 мл материала Несколько дней
Бактериологический метод 20-100 в 1 мл материала до 3 месяцев
ПЦР (полимеразная цепная реакция) 5-10 в 1 мл материала При желании пациента возможно срочное получение результатов или в течении нескольких дней

Туберкулиновая проба, или реакция Манту

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector